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第二章 細胞

顯微鏡

一、 光學顯微鏡

1.1  複式光學顯微鏡的各部分

 

1.2  光學顯微鏡的限制

?        細胞質顯得均勻。

?        放大率有限(最佳約能放大1500倍)。

?        解像度低。(把兩點清楚分辨的最短距離只有200 nm

 

1.3  玻片的製作

i.

固定fixation

組織放入固定劑(如甲醛溶液formalin)避免變質

ii.

脫水dehydration

組織放入酒精以增加濃度,直至組織內的水被酒精取締

iii.

清理clearing

組織放進有機溶劑,讓其更易與蠟溶合

iv.

包埋embedding

組織放進蠟內,讓其硬化以支持組織作切片

v.

切片sectioning

以切片機把蠟和組織切成薄片

vi.

除蠟dewaxing

把薄片放在玻片上,然後移除蠟

vii.

染色staining

改變細胞內各部分的折射率

viii.

裝片mounting

以加拿大香膠(Canada Balsam)把玻片處理作永久保存

 

1.4  複式光學顯微鏡下的細胞

?        細胞是生物的基本單元。

?        原生質是細胞內有生命物質的部分;細胞質是細胞核以外的原生質。

(a)   細胞膜:選透性,控制物質進出細胞。

(b)   細胞壁:植物細胞外層由原生質分泌的無生命壁,由纖維素構成,堅韌,用以支持和保護植物細胞。細胞之間有胞間層。

(c)   原生質:包含兩部分(細胞核內的核質和細胞核外的細胞質)。

(d)   細胞質:膠體透明物質,主要由水構成;所有生化反應皆在此進行。在細胞質以內有內含體(如澱粉顆粒、代謝廢物的晶體)和細胞器(進行特定功能的構造如粒線體、葉綠體和高爾基器)

 

二、 電子顯微鏡

?        構造與光學顯微鏡相似;

?        光學顯微鏡以玻璃作透鏡,透過改變透鏡和玻片之間的距離來聚焦;

?        電子顯微境以強力電磁鐵,透過改變電流來聚焦。

 

2.1  玻片的製作

?        基本過程與光學顯微鏡相同。

?        以四氧化鋨(osmium tetroxide)作固定(鋨會限制電子穿透,樣本含較高濃度鋨會有較少電子穿過,顯得較暗;相反沒有鋨的部分會容許較多電子穿過,顯得較光;從而把樣本分為不同層次。

?        以鑽石刀進行切片。

?        以銅格網盛載樣本取締玻片。

 

2.2  應用時的注意事項

?        電子在空氣中流動慢:在真空下進行觀察。

?        觀察樣本要薄:需要獨特切片方式。

?        電子流動時帶高能量,樣本溫度上升:需要降溫系統。

 

2.3  電子顯微鏡的優點和缺點

?        優點:高解像度(0.5 nm),高放大率(螢幕放大率達250 000倍)

?        缺點:組織必須殺死(因為在真空下觀察);樣本製作過程中樣本容易變形等

 

資料來源:以撒之家